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流式細胞儀主要由液流系統、光學系統、檢測系統、分選系統（可選）和數據分析系統五部分組成，工作流程如下： - 樣本制備與懸浮
- 將細胞或顆粒（如血細胞、腫瘤細胞、微生物）懸浮于液體介質（如磷酸鹽緩沖液）中，形成單細胞懸液。
- 若需分析特定標記物（如表面抗原、DNA），需用熒光染料或熒光標記抗體對樣本進行染色。
- 液流系統：單細胞排列
- 鞘液（Sheath Fluid）：通過高壓泵將無細胞的緩沖液（鞘液）注入流動室，形成穩定的層流。
- 樣本液：細胞懸液從噴嘴中心注入，被鞘液包裹并壓縮，形成單細胞液柱（直徑約3-10μm）。
- 作用：確保細胞逐個通過激光檢測區，避免重疊或聚集，提高分析精度。
- 光學系統：激光激發與信號產生
- 激光器：通常采用氬離子激光（488nm，用于激發FITC、PE等熒光染料）或半導體激光（如633nm，用于激發APC）。
- 細胞通過激光束：當單細胞經過激光聚焦點時，發生以下相互作用：
- 前向散射光（FSC）：與激光同軸方向的光散射，反映細胞大小（大細胞散射更強）。
- 側向散射光（SSC）：垂直于激光方向的光散射，反映細胞內部復雜度（如顆粒多少、核質比）。
- 熒光信號：若細胞被熒光染料標記，激光激發后發射特定波長的熒光，被光電倍增管（PMT）或雪崩光電二極管（APD）檢測。
- 檢測系統：信號轉換與放大
- 光電轉換：PMT將光信號轉換為電信號，其增益可調以適應不同熒光強度。
- 信號放大與數字化：電信號經放大器處理后，由模數轉換器（ADC）轉換為數字信號，形成數據脈沖。
- 多參數檢測：現代流式細胞儀可同時檢測10-20種熒光信號，通過不同波長的濾光片分離。
- 分選系統（可選）：細胞分離
- 電荷分選：對目標細胞施加正/負電荷，通過偏轉板將其導入特定收集管。
- 微流控分選：利用微流體芯片精確控制細胞路徑，實現高純度分選（如用于單細胞測序）。
- 應用：分離特定細胞亞群（如CD4+ T細胞、干細胞）用于后續培養或分析。
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發表于 2025-8-8 15:30:18
