質(zhì)粒小量提取試劑盒II型，Plasmid Mini Kit II(5)使用說明書
上海遠(yuǎn)慕詳細(xì)為您介紹美國(guó)Omega系列產(chǎn)品的用途，性能，操作步驟，注意事項(xiàng)等資訊，本司為Omega代理商，其系列有：96孔磁珠質(zhì)粒小量提取試劑盒，磁珠無內(nèi)毒素小量提取試劑盒，膠回收/PCR純化試劑盒，聚丙烯酰胺凝膠RNA純化試劑盒，PCR純化試劑盒，96孔板PCR產(chǎn)物純化試劑盒，超薄柱型PCR產(chǎn)物純化試劑盒，其他系列等，了解更多Omega產(chǎn)品詳情請(qǐng)！
名稱：質(zhì)粒小量提取試劑盒II型
品牌：Omega
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
英文名/型號(hào)：Plasmid Mini Kit II(5)
用途：從小于15ml培養(yǎng)過夜的菌液提取50-70ug高純度質(zhì)粒DNA
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Plasmid Mini Kit II(5)特性與優(yōu)點(diǎn)： 安全－無酚lvfang等危險(xiǎn)的有機(jī)物抽提 可靠－操作簡(jiǎn)單，每次都能獲得理想的效果 快速－可在35分鐘內(nèi)完成一次抽提工作 方便－用小型柱就可以獲得較大量的質(zhì)粒DNA
質(zhì)粒小量提取試劑盒II型操作流程：
1.取過夜菌1.5毫升，5000g離心1分鐘收集細(xì)菌沉淀，棄上清。再重復(fù)一次，每管共收集3毫升過夜菌沉淀。通常大腸桿菌宜用LB培養(yǎng)過夜（16小時(shí)左右）至OD值為2-4。建議5000g（通常為5000rpm左右）室溫離心1分鐘，如沉淀不充分則適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。時(shí)間過長(zhǎng)或離心速度過快會(huì)使沉淀過于緊密，不利于加入溶液I后散開沉淀。直接倒掉上清，再倒入約1.5毫升菌液并重復(fù)上述操作，然后倒置于吸水紙上（可用普通草紙），使液體流盡。如果細(xì)菌密度明顯偏低，可考慮使用更多菌液，再重復(fù)上述操作1-2次。對(duì)于高拷貝質(zhì)粒所用菌量一般不能超過5毫升，對(duì)于低拷貝質(zhì)粒所用菌量一般不能超過10毫升。過量的細(xì)菌會(huì)導(dǎo)致后續(xù)的裂解不充分。
2.每管加入250微升溶液I，重懸細(xì)菌沉淀。確保沉淀散開，無可見細(xì)菌團(tuán)塊。確認(rèn)溶液I中已經(jīng)添加了RNase A。速度vortex 5-10秒或更長(zhǎng)時(shí)間，懸起沉淀。一定要充分混勻，對(duì)著光亮處觀察應(yīng)呈 均勻的懸濁液，無明顯細(xì)菌團(tuán)塊或絮塊。如果沒有vortex，可以用槍吹打沉淀使沉淀逐漸散開或用手指把沉淀彈開。
3.每管加入250微升溶液II，輕輕顛倒離心管4-6次，使細(xì)菌裂解，溶液透明。切勿vortex！vortex或其它劇烈操作會(huì)導(dǎo)致基因組DNA斷裂，易導(dǎo)致*終所得質(zhì)粒被基因組DNA污染。顛倒4-6次后，溶液應(yīng)變得透明，無團(tuán)塊或絮狀物。如果加入溶液I后細(xì)菌沒有散開，那么顛倒4-6次后，可能還會(huì)有團(tuán)塊或絮狀物。遇到有少量團(tuán)塊或絮狀物產(chǎn)生的情況，可以增加顛倒次數(shù)3-5次，再室溫放置2-3分鐘，但總裂解時(shí)間不可超過5分鐘。
4.每管加入350微升溶液III，隨即顛倒離心管4-6次混勻，可見白色絮狀物產(chǎn)生。切勿vortex！顛倒次數(shù)也不宜過多，否則易導(dǎo)致*終所得質(zhì)粒的質(zhì)量下降。
5.速（13,000rpm左右）室溫離心10分鐘。離心后會(huì)產(chǎn)生白色沉淀。離心時(shí)準(zhǔn)備好下一步需使用的質(zhì)粒純化柱，廢液收集管，并在純化柱上做好標(biāo)記。
6.將上一步驟離心后的上清倒入或吸入到質(zhì)粒純化柱內(nèi)。速離心30-60秒，倒棄收集管內(nèi)液體。質(zhì)粒倒入質(zhì)粒純化柱后，可以不用等待，直接離心。倒棄收集管內(nèi)的液體后，保留收集管繼續(xù)使用。
7.在質(zhì)粒純化柱內(nèi)加入750微升溶液IV，速離心30-60秒，洗去雜質(zhì)，倒棄收集管內(nèi)液體。加入溶液IV后可以不用等待，直接離心。倒棄收集管內(nèi)的液體后，保留收集管繼續(xù)使用。
8.速再離心1分鐘，除去殘留液體并使痕量乙醇揮發(fā)。 注意：倒棄收集管內(nèi)液體后再離心，才能去除微量的溶液IV。微量的溶液IV會(huì)影響質(zhì)粒的質(zhì)量。
9.將質(zhì)粒純化柱置于1.5毫升離心管上，加入50微升溶液V至管內(nèi)柱面上，放置1分鐘。溶液 V 需要直接加至管內(nèi)柱面，使液體被純化柱吸收。如果不慎將溶液 V 沾在管壁上，一定要震動(dòng)管子，使液體滑落到管底，以便被純化柱吸收。也可以用重蒸水或 MiliQ 級(jí)純水替代溶液 V，但是水的 pH 應(yīng)不小于 6.5。溶液 V 加入后放置時(shí)間稍長(zhǎng)，對(duì)于增加質(zhì)粒產(chǎn)量會(huì)略有幫助。
10.速離心1分鐘，所得液體即為高純度質(zhì)粒。 通常所得質(zhì)粒濃度為0.1-0.3mg/ml左右。如果想得到高濃度的質(zhì)粒，可以采用常規(guī)的乙醇沉淀方法濃縮質(zhì)粒。
該試劑盒專門為提供較大量的質(zhì)粒而設(shè)計(jì)，硅膠柱結(jié)合質(zhì)粒能力是I型的兩倍。適合于從5-15ml培養(yǎng)過夜的細(xì)菌培養(yǎng)液中抽提高達(dá)70µg的質(zhì)粒DNA，小量抽提與中量抽提之間的空白。純化的質(zhì)粒可以直接用于自動(dòng)測(cè)序、限制性內(nèi)切酶酶切以及PCR 、標(biāo)記以及體外轉(zhuǎn)錄等實(shí)驗(yàn)。
標(biāo)簽：Plasmid Mini Kit II(5) 質(zhì)粒小量提取試劑盒II型 質(zhì)粒小量提取試劑盒
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