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高效液相色譜法基本原理

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樓主
發表于 2024-8-5 14:21:28 | 只看該作者 |倒序瀏覽 |閱讀模式
  高效液相色譜法利用固定相和流動相之間的相互作用,根據樣品中各組分在固定相上的保留時間不同,實現組分的分離。樣品通過泵進入色譜柱,在色譜柱中與固定相和流動相相互作用,不同組分因保留時間不同而分離,最后通過檢測器檢測并記錄。
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沙發
發表于 2024-8-5 14:21:49 | 只看該作者
  HPLC的分離機制與常規柱色譜相同,但填料更加精細,需高壓泵推動,柱效高,分析速度快。其分離原理是:溶于流動相中的各組分經過固定相時,由于與固定相發生作用(如吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同,在固定相中滯留時間不同,從而先后從固定相中流出。
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發表于 2024-8-5 14:22:06 | 只看該作者
  根據分離機理的不同,HPLC可分為多種類型,主要包括:

  液固吸附色譜:流動相為液體,固定相為固體吸附劑,根據物質吸附作用的不同來分離物質。

  液液分配色譜:流動相和固定相都是液體的色譜法,利用樣品組分在兩種不相溶的液相間的分配來進行分離。根據流動相和固定相極性的不同,又可分為正相分配色譜法和反相分配色譜法。

  離子交換色譜:利用離子交換樹脂作為固定相,通過離子交換作用實現組分的分離。

  離子對色譜法:在流動相中加入離子對試劑,使樣品中的離子與試劑離子形成離子對,從而提高樣品在固定相上的保留能力,實現分離。

  分子排阻色譜(或凝膠滲透色譜):利用多孔性凝膠作為固定相,根據樣品分子的大小和形狀進行分離。
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地板
發表于 2024-8-5 14:22:42 | 只看該作者
  HPLC系統通常包括以下幾個主要部分:

  泵:提供穩定的流動相流速和壓力,確保樣品在色譜柱中的穩定流動。

  進樣器:手動或自動將樣品注入色譜系統。

  色譜柱:裝有固定相,是樣品分離的關鍵部件。

  檢測器:如紫外檢測器,用于檢測從色譜柱流出的組分,并將其轉換為可測量的信號。

  數據處理系統:收集、處理檢測器輸出的信號,生成色譜圖,用于結果分析和解釋。
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  • TA的每日心情
    開心
    2024-7-31 11:59
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    [LV.1]初來乍到

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    發表于 2024-8-5 14:23:17 | 只看該作者
      在實際操作中,主要通過改變流動相的組成來調節樣品在色譜柱的保留值和選擇性,從而使不同樣品得到分離。此外,還需要注意流動相的質量、溶劑的切換、系統的清洗和維護等,以確保HPLC系統的正常運行和結果的準確性。
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