直鏈淀粉和支鏈淀粉的測定

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一、測定原理

直鏈淀粉與碘作用生成純藍色復合物，支鏈淀粉與碘作用生成紫紅色復合物。兩種淀粉與碘形成的絡(luò)合物在可見光波段具有不同的吸收峰，通過雙波長比色法（如直鏈淀粉在λ?和λ?波長下測定，支鏈淀粉在λ?和λ?波長下測定），可消除背景干擾，利用吸光度差值與淀粉濃度的線性關(guān)系進行定量分析。

二、測定步驟

• 標準溶液制備
  
  • 直鏈淀粉標準液：稱取直鏈淀粉純品（如馬鈴薯直鏈淀粉）0.1000g，用0.5mol/L KOH溶液溶解后定容至100ml，配制成1mg/ml標準液。
  • 支鏈淀粉標準液：稱取支鏈淀粉純品（如玉米支鏈淀粉）0.1000g，同法配制成1mg/ml標準液。
    
• 標準曲線繪制
  
  • 直鏈淀粉標準曲線：吸取直鏈淀粉標準液0、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3ml于50ml容量瓶中，加蒸餾水30ml，用0.1mol/L HCl調(diào)pH至3.5，加入0.5ml碘試劑（2g碘化鉀+0.2g碘溶于100ml蒸餾水），定容后靜置20min。以蒸餾水為空白，在λ?和λ?波長下測定吸光度差值（ΔA直=Aλ?-Aλ?），繪制ΔA直與直鏈淀粉含量（mg）的標準曲線。
  • 支鏈淀粉標準曲線：吸取支鏈淀粉標準液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5ml于50ml容量瓶中，同法操作，在λ?和λ?波長下測定吸光度差值（ΔA支=Aλ?-Aλ?），繪制ΔA支與支鏈淀粉含量（mg）的標準曲線。
    
• 樣品測定
  
  • 試樣制備：取風干樣品粉碎后過60目篩，用乙醚脫脂，稱取脫脂樣品0.1g（精確至1mg）于50ml容量瓶中。
  • 提取：加0.5mol/L KOH溶液10ml，沸水浴加熱10min，冷卻后定容至50ml，靜置。
  • 測定：吸取樣品液2.5ml兩份（一份為測定液，一份為空白液），均加蒸餾水30ml，用0.1mol/L HCl調(diào)pH至3.5。測定液中加入0.5ml碘試劑，空白液不加碘試劑，均定容至50ml后靜置20min。以空白液為對照，在λ?、λ?、λ?、λ?波長下測定吸光度，計算ΔA樣直=Aλ?-Aλ?和ΔA樣支=Aλ?-Aλ?。
  • 結(jié)果計算：根據(jù)標準曲線查得樣品中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量（mg），按公式計算其百分比：
    
    
  
  

\text{直鏈淀粉含量（%）} = \frac{C_1 \times 50 \times 10 \times (1-W_1-W_2)}{m \times 1000} \times 100
\text{支鏈淀粉含量（%）} = \frac{C_2 \times 50 \times 10 \times (1-W_1-W_2)}{m \times 1000} \times 100

弘農(nóng)太守

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